测定原理：
 
PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+没有；通过测定340 nm光吸收下降速率，来计算PDC活性。
 
需要的仪器，耗材:
 
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。
 
测定意义：
 
PDC主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。测定原理：PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+没有；通过测定340 nm光吸收下降速率，来计算PDC活性。需要的仪器，耗材:研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。
 
简要介绍：
PDC主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。测定原理：PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+没有；通过测定340 nm光吸收下降速率，来计算PDC活性。
产品详细描述
商品货号：
商品品牌：
规格
基本售价：
选择规格
BC1075-100管/96样
Solarbio
100管/96样
1660.00元
 
 
 产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体18mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存。
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存。
混合试剂：临用前配制，将试剂三和试剂四用适量试剂二溶解后再全部转移到试剂二中备用。
试剂五：液体2mL×1瓶，4℃保存。
 
产品说明：
PDC主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。
PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+没有；通过测定340 nm光吸收下降速率，来计算PDC活性。
 
自备仪器和用品：
   台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量石英比色皿/ 96孔（UV板）、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
 
操作步骤：
一、粗酶液提取：   
1、细胞或微生物样品的制备：
先收集细胞或微生物样品到离心管内，弃上清，按照每500万细胞或微生物加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）。10000rpm，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2、组织样品：
称取约0.1g组织，加入1mL提取液，冰上充分研磨。16000g  4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：
1、 紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 试剂一37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴提前预热30min。
3、 操作表：
试剂名称（μL）
测定管
空白管
试剂一
140
140
试剂五
20
20
混合试剂
20
20
样本
20
-
蒸馏水
-
20
迅速混匀后于340nm比色，记录10s和70s的吸光值，测定管的记为A1和A2，空白管的记为A3和A4，计算ΔA=（A1-A2）-（A3-A4）。空白管只需做1-2次。
 
三、PDC活性计算：
A.使用微量石英比色皿测定的计算：
1、血清（浆）PCD活力的计算：
单位的定义：37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）中，每毫升血清（浆）在反应体系中每分钟催化1 μmol NADH氧化定义为一个酶活力单位。
PDC（U/mL）= [(A3-A4)-(A1-A2)]×V反总÷(ε×d)×106÷V样本÷T=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)]。
2、 组织中PDC活力的计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）中，每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化1μmol NADH氧化定义为一个酶活力单位。
PDC（U/mg prot）=[(A3-A4)-(A1-A2)]×V反总÷(ε×d)×106÷(V样本×Cpr)÷T
=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)] ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）中，每g组织鲜重在反应体系中每分钟催化1μmol NADH氧化定义为一个酶活力单位。
PDC（U/g 鲜重）= [(A3-A4)-(A1-A2)]×V反总÷(ε×d)×106÷ (W÷V提取×V样本)÷T
=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)] ÷W。
3、细菌或培养细胞中PDC活力的计算：
按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）中，每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1μmol的NADH氧化定义为一个酶活力单位。
PDC（U/104 Cell）= [(A3-A4)-(A1-A2)]×V反总÷(ε×d)×106÷(V样本÷V提取×500)÷T
                 =3.2×10TUNEology 波长可调检测卡盒-->